細胞培養(yǎng)污染的兩種主要形式是化學(xué)污染和生物污染。
化學(xué)細胞培養(yǎng)污染是指細胞培養(yǎng)物摻入對培養(yǎng)系統(tǒng)產(chǎn)生負面影響的非生命物質(zhì)。這些物質(zhì)可能是什么或在哪里可以找到它們?化學(xué)污染可能發(fā)生在:
1.培養(yǎng)基,用于細胞培養(yǎng)的生長培養(yǎng)基。這是可能發(fā)現(xiàn)大多數(shù)化學(xué)污染物的地方。
2.水:不正確的純凈水,實際上也可能是過度純凈的水。高純水實際上具有很強的反應(yīng)性,會導(dǎo)致用于創(chuàng)建和維持細胞培養(yǎng)的設(shè)備中浸出有毒化學(xué)物質(zhì)。
3.某些類型的血清,一種富含蛋白質(zhì)的液體。
4.內(nèi)毒素,是革蘭氏陰性菌的毒素。
5.某些類型的介質(zhì)暴露在熒光燈下時會產(chǎn)生自由基。
6.重金屬。
7.來自塑料儲存容器和管道的增塑劑。
8.設(shè)備上殘留的清潔劑和消毒劑。
另一種主要類型的細胞培養(yǎng)物污染來自生物細胞培養(yǎng)物污染,即通過活生物體摻入細胞培養(yǎng)物,例如:
1.細菌
2.酵母
3.病毒
4..支原體
5.原生動物
6.無脊椎動物
7.來自其他細胞系的交叉污染
這些生物污染物的來源包括從消毒不當(dāng)?shù)挠闷泛蜌馊苣z等。#細胞培養(yǎng)瓶#
如何識別細胞培養(yǎng)污染?
識別細胞污染可以通過多種方法檢測生物細胞培養(yǎng)污染。這些方法主要包括:
1.用肉眼目視檢查。例如,混濁的薄膜出現(xiàn)可能表明存在細菌污染。
2.顯微鏡檢查(包括電子顯微鏡、生物顯微鏡),在顯微鏡下可以觀察到許多不同種類的有害污染物的存在,比如:細菌、病毒和酵母菌。
3.測試 pH 值。例如,酵母的嚴重污染可能會增加培養(yǎng)物的 pH 值,而細菌污染會降低 pH 值。
4.采用免疫測定法進行測定,例如 ELISA 或酶聯(lián)免疫吸附測定,其中稱為抗體的蛋白質(zhì)附著在抗原(潛在污染物)上以揭示污染物的存在。
一般情況下,檢測化學(xué)污染通常比檢測生物污染困難得多。通常,它歸結(jié)為一個清除污染的過程。如果通過上述檢測方法排除了生物污染,那么化學(xué)污染就有可能發(fā)生。
一旦懷疑,化學(xué)污染物的鑒定可能需要以逐步的方式進行,其中對每種可能的化學(xué)污染物進行處理和測試。例如,可能需要測試水的純度,或者可能需要建立不同介質(zhì)、溶液之間的對比實驗等等。
總體來說,細胞培養(yǎng)時,細胞培養(yǎng)物面臨的污染主要包括化學(xué)污染和生物污染兩個方面:即化學(xué)細胞培養(yǎng)物污染、細胞培養(yǎng)物被重金屬、清潔劑、毒素等非生命物質(zhì)污染和生物細胞培養(yǎng)污染物、活生物體(如細菌、酵母和真菌)等生物物質(zhì)污染。
排除細胞污染的主要方法有:可以通過顯微鏡、pH 值測試或 ELISA 等高級測試目視發(fā)現(xiàn)生物細胞培養(yǎng)污染物。對于支原體的清除可以使用支原體清除試劑盒。
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